Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Blue)

Mpempe nwamba: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) bụ ihe ngwọta maka 2 × ezigbo oge quantitative PCR amplification ji oke uche na nkọwapụta, na-acha anụnụ anụnụ na agba, ma nwee mmetụta nke ntinye mgbakwunye sample.Ihe bụ isi akụrụngwa Taq DNA polymerase na-eji mgbochi mmadụ na-ekpo ọkụ mmalite na-egbochi nkwalite na-abụghị nke akọwapụtara n'ụzọ dị irè n'ihi nkwụsị nke primer n'oge nkwadebe nlele.N'otu oge ahụ, usoro ahụ na-agbakwụnye ihe ndị na-akwalite iji melite nrụpụta arụmọrụ nke mmeghachi omume PCR ma mee ka mmụba nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nwere ọdịnaya GC dị iche iche (30 ~ 70%), ka PCR na-eme ka ọnụọgụgụ nwee ike nweta ezigbo mmekọrịta linear na ọnụ ọgụgụ buru ibu. mpaghara.Ngwaahịa a nwere ROX Passive Reference Dye pụrụ iche, nke dabara n'ọtụtụ ngwa qPCR.Ọ dịghị mkpa ịgbanwe ntinye nke ROX na ngwá ọrụ dị iche iche.Ọ dị mkpa naanị ịgbakwunye primers na ndebiri iji kwadebe usoro mmeghachi omume maka mmụba.

Ngwa

Universal Blue qPCR Master Mix

Ọnọdụ nchekwa

A na-ebufe ngwaahịa ahụ na ngwugwu ice ma nwee ike ịchekwa ya na -25 ℃ ~ -15 ℃ maka ọnwa 18.Ọ dị mkpa iji zere irradiation ọkụ siri ike mgbe ị na-echekwa ma ọ bụ na-akwadebe usoro mmeghachi omume.

Nkọwapụta

Ntuziaka

1.Reaction System

[Rịbama ama]: Gwakọta nke ọma tupu ejie ya ka ịzenarị afụ oke site na ịma jijiji siri ike.

a) Ntụkwasị obi nke mbụ: Ntinye uche nke ikpeazụ bụ 0.2μmol / L, a pụkwara ịhazi ya n'etiti 0.1 na 1.0μmol / L dị ka o kwesịrị ekwesị.

b) Nleba anya n'ụdị: Ọ bụrụ na template bụ cDNA ngwaahịa ngwaahịa anaghị agbaze, olu ejiri ekwesịghị gafere 1/10 nke mkpokọta olu mmeghachi omume qPCR.

c) Ntughari ihe nlere: A na-atụ aro ka ị mebie ihe ngwọta ngwaahịa cDNA site na ugboro 5-10.Ọnụ ego kachasị mma nke ndebiri agbakwunyere ka mma mgbe uru Ct nwetara site na nkwalite bụ okirikiri 20-30.

d) Usoro mmeghachi omume: A na-atụ aro ka iji 20μL ma ọ bụ 50μL iji hụ na ịdị irè na nkwughachi nke nkwalite mkpụrụ ndụ ihe mgbaru ọsọ.

e) Nkwadebe sistemu: Biko kwadebe na bench dị ọcha ma jiri ndụmọdụ na tubes mmeghachi omume na-enweghị ihe fọdụrụ n'ime ya;a na-atụ aro ka iji ndụmọdụ na katrij nzacha.Zere mmetọ obe na mmetọ ikuku.

2.Mmemme mmeghachi omume

Mmemme ọkọlọtọ

Mmemme ngwa ngwa

[Rịba ama]: Mmemme ngwa ngwa dabara maka ọnụ ọgụgụ ka ukwuu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa, enwere ike ịnwale mmemme ọkọlọtọ maka mkpụrụ ndụ ihe nketa dị mgbagwoju anya nke abụọ.

a) Okpomọkụ na oge na-agwụ ike: Biko gbanwee dabere n'ogologo primer na mkpụrụ ndụ ebumnuche.

b) Nnweta mgbaàmà fluorescence (★): Biko tọọ usoro nnwale dịka ihe achọrọ na ntuziaka maka iji ngwa.

c) Usoro mgbaze: Enwere ike iji mmemme ndabere akụrụngwa mee ihe.

3. Ntụle nsonaazụ 

Achọrọ opekempe ihe nṅomi atọ dị ndụ maka nyocha ọnụọgụgụ.Mgbe mmeghachi omume ahụ gasịrị, ọ dị mkpa ka ekwenye na akụkụ nkwalite na agbaze agbaze.

3.1 Usoro nkwalite:

Usoro nkwalite ọkọlọtọ bụ ụdị S.Ntụle ọnụ ọgụgụ kachasị mma mgbe uru Ct dara n'etiti 20 na 30. Ọ bụrụ na uru Ct na-erughị 10, ọ dị mkpa ka ịmegharị template ahụ ma mee ule ahụ ọzọ.Mgbe uru Ct dị n'etiti 30-35, ọ dị mkpa ịbawanye ntinye template ma ọ bụ olu nke usoro mmeghachi omume, ka ọ dịkwuo mma n'ịkwalite arụmọrụ ma hụ na izi ezi nke nyocha nsonaazụ.Mgbe uru Ct karịrị 35, nsonaazụ ule enweghị ike nyochaa okwu nke mkpụrụ ndụ ihe nketa, mana enwere ike iji ya mee nyocha qualitative.

3.2 Usoro mgbaze:

Otu ọnụ ọgụgụ kasị elu nke mgbaze na-agbaze na-egosi na nkọwapụta mmeghachi omume dị mma ma nwee ike ịme nyocha ọnụọgụgụ;Ọ bụrụ na agbaze agbaze na-egosi okpukpu abụọ ma ọ bụ ọtụtụ ọnụ ọgụgụ, enweghị ike ịme nyocha ọnụọgụ.Usoro mgbaze na-egosi elu okpukpu abụọ, ọ dịkwa mkpa iji kpee ikpe ma ọnụ ọgụgụ na-abụghị nke a na-eche ihu bụ primer dimer ma ọ bụ mmụba na-abụghị nke DNA agarose gel electrophoresis.Ọ bụrụ na ọ bụ primer dimer, a na-atụ aro ka ị belata ntinye nke primer ma ọ bụ megharịa primers na-arụ ọrụ dị elu.Ọ bụrụ na ọ bụ nkwalite na-abụghị nke akọwapụtara, biko welie okpomọkụ na-ebelata, ma ọ bụ megharịa primers na nkọwapụta.

Ihe ndetu

Biko yiri PPE dị mkpa, uwe ụlọ nyocha na uwe aka, iji hụ na ahụike na nchekwa gị!

Ngwaahịa a bụ maka nyocha naanị!